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| 1 | 人锌转运体8强免疫原性片段的预测及原核表达鉴定显示文摘目的筛选人锌转运体8(Zinc transporter8,ZnT8)中强免疫原性片段,并对其进行克隆表达及鉴定。方法采用生物信息学软件预测ZnT8结构特征,筛选出具有强免疫原性的N末端片段ZnT8(N),经PCR(Polymerase Chain Reaction)技术扩增,构建表达质粒pET32a-ZnT8(N),转化入E.coliBL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析及Westernblot鉴定。结果从ZnT8分子中筛选出具有140个氨基酸的肽段ZnT8(N),重组质粒pET32a-ZnT8(N)经酶切和测序鉴定证实构建成功。转入大肠杆菌进行表达,表达产物相对分子质量(Mr)约32000,与预期值相符,并经免疫印迹检测鉴定为阳性,融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量45%。结论筛选获得了人胰岛细胞来源的ZnT8强免疫原性片段,并在原核系统中成功表达。 | 吴玥 刘宝英 徐静 姜友昭 陈兵 | 2010 | 第三军医大学学报2010，32，11： | 0 |
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