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| 1 | 重组人ZP3蛋白在大肠杆菌中的高效表达显示文摘目的:用基因工程方法制备重组人ZP3蛋白。方法:以全长人ZP3 cDNA片段为模板,通过PCR扩增出编码人ZP3蛋白不同肽段的cDNA片段,然后将这些cDNA片段分别插入到表达载体pET-I9b的Nco I-BamH I或Nde I-BamH I位点内,共构建成6种人ZP3蛋白非融合表达质粒(pFZP3-1-pEZP3-6)和3种人ZP3蛋白融合表达质粒(pFZP3-7-Pfzp3-9).将这9种表达质粒分别转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)感受态细胞并选择出Ap转化子,将Ap转化子接种到NZCYM培养基中(含AP 100μg/mL),在35-37℃振荡培养到对数生长期,加入IPTG至1.0-1.5mmol/L浓度诱导培养3h,离心收集细胞进行SDS-PAGE电泳检测和Western Blot杂交分析。结果:这9种人ZP3蛋白表达质粒在大肠杆菌Rosetta2(DE3)中得到高效表达,目的蛋白占总细胞蛋白的10-25%,表达产物均以包涵体形式存在。结论:成功构建了重组人ZP3蛋白原核表达系统,为地一步研究和应用人ZP3蛋白打下了基础。 | 叶志华 梁建庆 | 2006 | 生物技术2006，16，6： | 0 |
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