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		题名	作者	年代	出处	被引量
	1	一种方便酶切鉴定的shRNA表达载体改建方法显示文摘目的建立一种用单限制性内切酶酶切来快速筛选重组小发夹RNA(shRNA)表达载体的方法。方法制备包含单一限制性内切酶ClaⅠ识别序列的双链DNA插入片段(ClaⅠ位点两侧碱基序列不互补),与BamHⅠ和HindⅢ线性化的shRNA表达载体pSilencer-4.1(不含ClaⅠ识别序列)构建载体pSilencer-4.1-ClaⅠ。用BamHⅠ和HindⅢ酶切pSilencer-4.1-ClaⅠ,将酶切产物与表达绿色荧光蛋白(GFP)shRNA的DNA模板(不含ClaⅠ识别序列)做连接反应,构建GFPshRNA表达质粒。提取阳性克隆质粒DNA,行ClaⅠ单酶切鉴定,对未被ClaⅠ线性化的质粒行DNA测序鉴定。结果DNA测序表明正确构建了shRNA表达载体pSilencer-4.1-ClaⅠ,以pSilencer-4.1-ClaⅠ为载体构建的GFPshRNA候选重组子中,不能被ClaⅠ线性化的均为GFPshRNA表达质粒。结论构建了可用于制备shRNA表达质粒的通用载体pSilencer-4.1-ClaⅠ,所引入的单一的ClaⅠ识别位点可以用来快速地筛选重组shRNA表达质粒。	单志新林秋雄符永恒邓春玉余细勇	2007	南方医科大学学报2007，27，9：	0

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