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| 1 | TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干扰载体的构建及其基因沉默作用显示文摘目的构建转谷氨酰胺酶2(TG2)和Mer受体酪氨酸激酶(Mertk)基因共沉默腺病毒干扰载体,并检测其基因沉默作用。方法首先构建能干扰TG2和Mertk蛋白表达的质粒载体pSUPER/TG2及pSUPER/Mertk,再将其干扰序列和H1启动子序列切下并连接到pAdTrack上,构建成pAdTrack/TG2/Mertk载体。将其转入含有pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中,回收并酶切鉴定重组腺病毒载体。将阳性腺病毒载体感染HEK293细胞,收集病毒,反复扩增后测定病毒滴度。分别以pAdTrack/TG2/Mertk、pAdTrack/TG2、pAdTrack/Mertk及pAdTrack/绿色荧光蛋白(GFP)感染RAW264.7细胞,采用免疫印迹法检测其TG2蛋白和Mertk蛋白的表达水平。结果pAdTrack/TG2/Mertk载体的病毒滴度为6.13×1010GFU/mL。经酶切鉴定,pAdTrack/TG2/Mertk含有插入的2个启动子和2个干扰序列,载体构建成功。pAdTrack/TG2和pAdTrack/TG2/Mertk组TG2蛋白的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/Mertk组(P<0.01),后两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。pAdTrack/Mertk和pAdTrack/TG2/Mertk组Mertk蛋白的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/TG2组(P<0.01),后两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干扰载体pAdTrack/TG2/Mertk构建成功,其能显著降低小鼠巨噬细胞样RAW246.7细胞中TG2蛋白和Mertk蛋白的表达水平。 | 郑江华 陈竞 陈开 朱彦彬 武国 | 2013 | 中国普外基础与临床杂志2013，20，4： | 1 |
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