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| 1 | 河南猪流感病毒H3N2分离株NP基因表达及抗原性分析显示文摘目的表达猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)H3N2分离株NP基因,获得具有良好抗原性的NP蛋白。方法 PCR扩增猪流感病毒A/swine/Henan/2/2008(H3N2)NP基因,经EcoR I和Xho I双酶切后插入p ET32a(+)载体,并转化大肠杆菌Rosset(DE3)菌株;PCR、EcoR I和Xho I双酶切及DNA测序鉴定重组质粒p ET32a-NP;IPTG诱导,表达、纯化NP并免疫家兔制备免疫血清,SDS-PAGE、WB测其反应原性;同时构建pc DNA3.1-NP并转染293T细胞,免疫荧光检测其免疫源性。结果成功构建重组载体p ET32a-NP和pc DNA3.1-NP,SDS-PAGE和WB显示融合蛋白约80 k D,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且纯化蛋白制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NP蛋白。结论正确表达SIV H3N2 NP蛋白,并有良好的抗原性,为研究猪流感病毒NP诊断抗原和亚单位疫苗奠定基础。 | 赵朴 苏红辽 刘兴友 赵坤 胡建和 王三虎 姚四新 郑玉姝 | 2015 | 中国公共卫生2015，31，9： | 0 |
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