小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立

查看全文 作　　者：[1]李伟 [1]李刚 [2]吴晓东索引[1]邱文英 [1]张坤 Hermann [3]Unger

机构地区：[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物分子营养学国家重点实验室,北京100193;[2]中国动物卫生与流行病学中心外来病诊断中心,青岛266032;[3]FAO/IAEA农业生物技术实验室

出　　处：《畜牧兽医学报》索引2010年第41卷第9期,共7页

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2008AA10Z411);'十一五'国家科技支持撑计划(2006BAD06A13-4);'948'项目(2007-G57-C);FAO/IAE(14515-0;R1) 摘　　要：本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%。结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。 关键词：小反刍兽疫病毒杆状病毒昆虫细胞间接ELISA

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