草鱼呼肠孤病毒TaqManreal-time PCR检测方法的建立

查看全文 作　　者：[1]周勇索引[1,2]曾令兵索引[1]范玉顶 [1]徐进 [2]马杰 [1]罗晓松 [1]肖艺

机构地区：[1]中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州434000;[2]华中农业大学水产学院,湖北武汉430071

出　　处：《水产学报》索引2011年第35卷第5期,共6页

基　　金：国家现代农业产业技术体系建设专项资金资助(nycytx-49-16);农业部公益性行业科研专项(200803013) 摘　　要：利用RT-PCR技术扩增出草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白编码区长度为1 250 bp的片段,克隆到pEGFP-N1载体上,构建重组质粒pEGFP-N1-VP6。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pEGFP-N1-VP6重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了草鱼呼肠孤病毒的荧光定量PCR检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.998 09,斜率为-3.373;对初始模板定量检测的范围为1×101~1×106copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出草鱼呼肠孤病毒,而对鲤春病毒血症病毒(SVCV)、传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)无检测信号。本研究建立的草鱼呼肠孤病毒TaqMan real-time PCR方法灵敏度高、特异性强,可进行定量分析,对草鱼出血病快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。 关键词：草鱼呼肠孤病毒 VP6蛋白编码基因 TaqManreal-timePCR 检测

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