基于磁珠和时间分辨荧光免疫分析的微囊藻毒素LR单链抗体筛选与鉴定

查看全文 作　　者：[1]刘媛 Huovinen [2]Tuomas [1]刘贤金索引[1]梁颖 [1]张存政 [1]谢雅晶 [1]贺江 [1]王耘 [1]张霄

机构地区：[1]江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,中国南京200014;[2]芬兰图尔库大学生物系,芬兰图尔库20520

出　　处：《中国农业科学》索引2012年第45卷第2期,共8页

基　　金：国家自然科学基金项目(30871658);江苏省农业自主创新项目(CX(10)236);农业部'948'项目(2011-Z46) 摘　　要：【目的】从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体。【方法】采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案。用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定。再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体;诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序。【结果】两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88×10-6。第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍。最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微囊藻毒素LR的检测灵敏度(IC10)为13 ng.mL-1,抑制中浓度(IC50)为435 ng.mL-1,线性范围在31—5 952 ng.mL-1。【结论】本研究筛选到的单链抗体,有潜力应用于微囊藻毒素LR的免疫学检测或免疫亲和柱的制备,同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法。 关键词：微囊藻毒素LR 单链抗体时间分辨免疫分析磁珠

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