重组禽呼肠孤病毒S1133σ3基因表达及其免疫原性研究

查看全文 作　　者：[1]谢志勤 [1]谢芝勋索引[1]刘加波 [1]庞耀珊 [1]邓显文 [1]谢丽基索引[1]彭宜 [1]范晴

机构地区：[1]广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001

出　　处：《南方农业学报》索引2012年第43卷第8期,共4页

基　　金：新世纪百千万人才工程国家级人选专项项目(945200603);广西特聘专家专项经费资助项目(2011B020);广西留学回国人员基金项目(桂科回0639016;桂科回0144014) 摘　　要：【目的】构建禽呼肠孤病毒(ARV)S1133σ3基因的真核重组质粒,研究其表达蛋白的免疫原性,为研发ARV基因疫苗奠定基础。【方法】采用RT-PCR对ARVS1133毒株的σ3基因进行RT-PCR扩增,扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接后,转化大肠杆菌DH5α,然后提取重组质粒的DNA,经双酶切、PCR扩增鉴定和纯化。以阳性重组质粒pcDNA3.1-σ3免疫7日龄SPF雏鸡,同时设灭活S1133、表达σ3蛋白及生理盐水对照,二次加强免疫两周后,采用Westernblotting检测鸡群血清抗体;并用S1133毒株进行攻毒,4d后进行ARV检测。【结果】重组质粒pcDNA3.1-σ3的双酶切和RT-PCR扩增鉴定结果一致,均能扩增出约999bp目的条带;免疫攻毒试验结果表明,pcDNA3.1-σ3处理、灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为7.4%、3.7%、11.1%和29.6%,pcDNA-σ3处理与生理盐水处理的差异显著(P<0.05),但与灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理的差异不显著(P>0.05);病毒检出部位最高是关节,其次是胸腺和肾脏,胸腺检出率为零。【结论】真核表达ARVS1133σ3蛋白具有较好的免疫保护,可作为免疫抗原进行下一步的疫苗中和试验。 关键词：禽呼肠孤病毒 S1133毒株 σ3基因重组质粒免疫原性

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