抗GPC3 C端抗体辅助杀伤肝癌细胞HepG2的活性检测及抗原表位鉴定

查看全文 作　　者：[1]张红飞;[1]张慧娜;[2]李军锋;[2]于虹;[2]代晓朋;[2]赵光宇;[2]郭彦;[1]王凯娟;[1]张建营;[2]周育森

机构地区：[1]郑州大学公共卫生学院,河南郑州450001;[2]军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071

出　　处：《生物技术通讯》索引2013年第24卷第1期,共6页

基　　金：国家自然科学基金青年基金(30900753) 摘　　要：目的:检测制备的7株抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)蛋白C端单克隆抗体是否具有辅助杀伤肝癌细胞的活性,并研究其识别的抗原表位。方法:用细胞增殖法检测制备的抗体是否具有抗体依赖细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性;用生物信息软件分析GPC3蛋白C端(359~580残基)的结构及抗原特征,并据此将其分为4个截短片段,将克隆的各基因片段分别连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,进行蛋白表达和纯化,用间接ELISA和Western印迹分析GPC3C端单克隆抗体的表位识别情况。结果与结论:制备的7株单克隆抗体对肝癌细胞HepG2均具有不同程度的辅助杀伤作用,其中5号单克隆抗体的辅助杀伤效果最好;表达并纯化了GPC3C端4个截短片段的重组蛋白;间接ELISA和Western印迹检测结果表明,7株抗体均特异性结合GPC3蛋白的473~525残基区段。 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 单克隆抗体肝癌细胞HEPG2 抗体依赖细胞介导的细胞毒性表位识别

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