大肠杆菌重组表达磷脂酶C的发酵工艺优化

查看全文 作　　者：[1]赵金星 [1]张梁索引[1]顾正华 [1]丁重阳 [1]石贵阳索引

机构地区：[1]江南大学食品科学与技术国家重点实验室,工业生物技术教育部重点实验室,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏无锡214122

出　　处：《食品科学》索引2013年第34卷第9期,共7页

基　　金：国家“863”计划项目(2011AA100905);教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET-11-0665);江南大学食品科学与技术国家重点实验室自由探索资助课题(SKLF-ZZA-201201) 摘　　要：以重组表达铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 41磷脂酶C的大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-plcH为考察菌株,从TB培养基出发,在优化缓冲液、碳源种类和质量浓度的基础上,比较异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、乳糖诱导重组酶表达的效果,并考察甘氨酸对重组酶发酵的影响;最后,在7L发酵罐规模对上述优化工艺进行放大验证。结果表明:重组大肠杆菌最适培养基组成为:蛋白胨12g/L、酵母膏24g/L、甘油5g/L,0.25mol/L Tris-HCl(pH7.2~7.4)缓冲液配制;在此培养基中添加卡那霉素(Kana)的质量浓度至0.15mg/mL,37℃、200r/min培养6h后,添加乳糖至终质量浓度为5g/L,在25℃、150r/min诱导培养20 h,重组磷脂酶C活力可达到(1422.42±37.17)U/mL;7L发酵罐实验中,总酶活力达到(11583.35±70.21)U/mL,比摇瓶条件下提高了7倍左右,其中胞内酶活力最高为(10957.97±58.03)U/mL,胞外酶活力最高为(645.27±13.87)U/mL。 关键词：磷脂酶C 重组大肠杆菌发酵过程工艺优化

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