华东葡萄转录因子VpSBP3基因原核表达、纯化及多克隆抗血清制备

查看全文 作　　者：[1]王浩;[1]侯鸿敏;[1]殷向静;[1]宋军阳;[1]王西平

机构地区：[1]西北农林科技大学园艺学院·农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点开放实验室·旱区作物逆境生物学国家重点实验室,西北农林科技大学,陕西杨凌712100

出　　处：《果树学报》索引2013年第30卷第5期,共7页

基　　金：国家自然科学基金(31071782);基本科研业务费科技创新专项(QN2011056) 摘　　要：【目的】制备华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)转录因子VpSBP3基因抗血清,为研究VpSBP3基因功能奠定基础。【方法】构建华东葡萄转录因子VpSBP3基因重组原核表达载体pGEX-VpSBP3,转化大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3),以IPTG为诱导剂诱导目的融合蛋白的表达。切胶电透析回收诱导表达的VpSBP3融合蛋白免疫新西兰兔,制备VpSBP3抗血清。【结果】重组原核表达载体pGEX-VpSBP3在DE3中高效表达出了分子质量为68 kD的GSTVpSBP3融合蛋白。回收的目的融合蛋白免疫新西兰兔后得到了抗血清,经Western-Blot检测,抗血清的免疫-抗原反应良好。【结论】在27℃、0.7 mmol·L-1IPTG过夜培养的诱导条件下,融合蛋白GST-VpSBP3过量表达。免疫大白兔获得的血清特异性强,效价高,可用于VpSBP3基因功能分析。 关键词：华东葡萄 VpSBP3 转录因子原核表达多克隆抗血清

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