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| 1 | 禽呼肠孤病毒地高辛探针的制备及应用显示文摘从带有禽呼肠孤病毒 (ARV)S1cDNA片段的重组质粒中回收 5 4 0bpS1cDNA片段 ,并制备出地高辛标记的ARVcD NA探针。其特异性检测结果表明 ,该探针能与ARV不同毒株核酸抽提物起特异性杂交反应 ,而与对照IBV、NDV、ILTV、MG、E .coli正常鸡胚尿囊液抽提的核酸及载体PBluescript空质粒DNA的杂交反应均为阴性 ,敏感性检测结果表明 ,该探针对ARVRNA的最低检出量为 0 .4 5ng。应用该探针对不同方法处理的病料进行检测 ,结果均出现杂交显色反应。 | 谢芝勋 廖敏 刘加波 邓显文 庞耀珊 谢志勤 唐小飞 | 2001 | 中国预防兽医学报2001，23，6： | 16 |
| 2 | 新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性显示文摘新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,获得重组质粒p ET-28a(+)-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达后经SDS-PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 k Da。重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。 | 陈海鹏 云涛 张存 余斌 倪征 华炯钢 崔言顺 | 2014 | 浙江农业学报2014，26，6： | 11 |
| 3 | 禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定显示文摘本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞,使σC基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidσC。通过脂质体介导将其转染到sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rBacσC。通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:σC蛋白在重组杆状病毒rBacσC感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达,分子质量约为37kD,表达的σC蛋白具有良好的反应活性。 | 孙美玉 秦立廷 高玉龙 祁小乐 高宏雷 王永强 王笑梅 | 2011 | 病毒学报2011，27，4： | 9 |
| 4 | 禽呼肠孤病毒σNS非结构蛋白基因的克隆和表达显示文摘采用RT-PCR技术扩增了禽呼肠孤病毒(ARV)S1133株与广西分离株R2 σNS非结构蛋白基因,将σNS基因克隆到质粒表达载体pGEX-4T-1上,获得的重组质粒经PCR、酶切鉴定以及测序分析,σNS基因的插入位置、大小和阅读框均正确,将阳性克隆命名为pGEX-S1133-σNS和pGEX-R2-σNS.构建好的重组质粒经37 ℃ 1 mmol/L IPTG诱导、SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,显示目的蛋白以包涵体方式表达,其蛋白质分子质量约为66.2 ku,约占菌体总量的31.5%~34.8%.Western-blotting分析表明,目的蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有较好的抗原性. | 谢丽基 谢芝勋 | 2005 | 中国兽医科技2005，35，12： | 7 |
| 5 | 重组禽呼肠孤病毒S1133σ3基因表达及其免疫原性研究显示文摘【目的】构建禽呼肠孤病毒(ARV)S1133σ3基因的真核重组质粒,研究其表达蛋白的免疫原性,为研发ARV基因疫苗奠定基础。【方法】采用RT-PCR对ARVS1133毒株的σ3基因进行RT-PCR扩增,扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接后,转化大肠杆菌DH5α,然后提取重组质粒的DNA,经双酶切、PCR扩增鉴定和纯化。以阳性重组质粒pcDNA3.1-σ3免疫7日龄SPF雏鸡,同时设灭活S1133、表达σ3蛋白及生理盐水对照,二次加强免疫两周后,采用Westernblotting检测鸡群血清抗体;并用S1133毒株进行攻毒,4d后进行ARV检测。【结果】重组质粒pcDNA3.1-σ3的双酶切和RT-PCR扩增鉴定结果一致,均能扩增出约999bp目的条带;免疫攻毒试验结果表明,pcDNA3.1-σ3处理、灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为7.4%、3.7%、11.1%和29.6%,pcDNA-σ3处理与生理盐水处理的差异显著(P<0.05),但与灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理的差异不显著(P>0.05);病毒检出部位最高是关节,其次是胸腺和肾脏,胸腺检出率为零。【结论】真核表达ARVS1133σ3蛋白具有较好的免疫保护,可作为免疫抗原进行下一步的疫苗中和试验。 | 谢志勤 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 彭宜 范晴 | 2012 | 南方农业学报2012，43，8： | 6 |
| 6 | 禽呼肠孤病毒分离株δ_3蛋白基因克隆及序列分析显示文摘本研究将禽呼肠孤病毒广西两分离株R1、R2和美国分离株Isol S1基因中编码σ_3蛋白的基因片段进行克隆和鉴定。对克隆片段测序后与参考株S1133、1733、138、176毒株的S1基因相应序列进行比较分析。结果表明,广西分离株R1、R2与美国分离株Isol以及S1133、1733、176毒株的核苷酸和推导氨基酸的同源性均在95%以上,上参考株138的同源性在81%~85%之间。由此可见,除了与138参考株外,广西分离株R1、R2和美国分离株Isol与其他比较的毒株的S1基因上存在很大的相关性。 | 廖敏 谢芝勋 刘加波 邓显文 庞耀珊 谢志勤 唐小飞 | 2004 | 中国预防兽医学报2004，26，5： | 5 |
| 7 | 新型鸭呼肠孤病毒病的研究进展显示文摘新型鸭呼肠孤病毒病是近年影响我国养鸭业的新发疫病,该病主要感染雏鸭,以肝脾出血和坏死为主要病理特征,因其能引起免疫抑制和生长障碍,给养鸭业造成严重经济损失。文章对新型鸭呼肠孤病毒病的流行病学、临床症状和病理变化、病原学、诊断方法、致病机制、预防与治疗措施等进行综述,阐述其研究进展,为深入研究和预防治疗该疫病提供参考。 | 马丰英 丛雁方 于春梅 黄冬 王睿智 蒋皓静 曲信芹 赵玉惠 王伟波 崔建新 蒋贻海 | 2022 | 中国家禽2022，44，9： | 4 |
| 8 | 鸡病毒性关节炎病毒C-98分离株S1基因的克隆与序列分析显示文摘提取鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)内蒙古分离株(C-98株)总RNA,参考GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)S1133株S1基因序列设计了2对引物,应用RT-PCR技术扩增了病毒S1基因,将S1基因cDNA克隆到pGEM-T Easy载体后测序。将测定序列拼接后与参考毒株ARV-176、ARV-138、ARV-S1133、MDRV-YJL的S1基因序列进行了比较。结果显示,AVAV C-98分离株的S1基因与强毒株ARV-176株的同源性最高,达99.9%;与MDRV-YJL的同源性为99.3%,与弱毒疫苗株ARV-S1133的同源性也达97.9%;与ARV-138株的同源性最低,为81.2%。表明,AVAV C-98株与参考毒株的差异较小,与疫苗株ARV-S1133有很高的同源性。 | 常继涛 关平原 乌日罕 马立峰 于富丽 特木尔巴根 | 2006 | 中国兽医科学2006，36，4： | 4 |
| 9 | 禽呼肠孤病毒P17蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其ELISA检测方法的建立显示文摘用设计合成的1对跨越禽呼肠孤病毒(ARV)P17非结构蛋白基因完整开放阅读框(ORF)的特异性引物,对ARV S1133株进行了RT-PCR扩增。扩增产物与pGEX-4T-1原核表达载体连接后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。经0.2 mmol/LIPTG诱导,表达的融合蛋白分子质量为42.4 ku,占菌体总蛋白的34%。表达产物P17蛋白经不同浓度尿素纯化后,纯度达到85%。Western-blotting显示,纯化的P17蛋白能与感染ARV的阳性血清反应,说明其具有抗原性。以此重组蛋白为包被抗原初步建立了用于鉴别检测ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的SPF鸡血清的ELISA。 | 谢芝勋 秦春香 谢丽基 | 2007 | 中国兽医科学2007，37，9： | 3 |
| 10 | 禽呼肠病毒P10、P17非结构蛋白基因的克隆及序列分析显示文摘根据GenBank上的禽呼肠病毒(ARV)S1基因序列,设计并合成了一对跨越P10和P17非结构蛋白基因的特异性引物,对13个ARV毒株进行RT—PCR扩增、克隆及序列测定。结果显示,13个ARV毒株的P10蛋白基因ORF全长均为297bp,编码98个氨基酸;P17蛋白基因ORF全长为441bp,编码146个氨基酸。这13个ARV毒株P10、P17蛋白基因核苷酸同源性分别在96.6%~100%和95.2%~99.3%之间,推导的氨基酸同源性分别在98.2%~100%和91.9%~99.0%之间。将这13个ARV毒株与Gen Bank上其他正呼肠病毒毒株,包括番鸭株(DRV)和飞狐上分离到的内尔森海湾病毒(Nelson Bay Vir US,NBV)及两个澳洲分离株(ARM—1和SOM-4)进行同源性比较和遗传进化树分析,结果表明,呼肠病毒有地域和种类的差别。 | 秦春香 谢芝勋 谢丽基 | 2006 | 动物医学进展2006，27，12： | 3 |
| 11 | 禽呼肠孤病毒分离株P10、P17、δ3蛋白基因的表达及抗血清的制备显示文摘禽呼肠孤病毒的感染在我国鸡群中非常普遍,它除了可引起鸡传染性关节炎外,还可能引起矮小综合症和免疫抑制等。从鸡群中分离到的不同毒株ARV的毒力差别较大,抗原性也不尽相同。ARV是一种双股RNA病毒,病毒颗粒中的基因组有10个不同的独立节段组成。 | 孙爱军 庄国庆 崔治中 | 2006 | 病毒学报2006，22，6： | 2 |
| 12 | 禽呼肠孤病毒σNS基因的克隆及其功能分析显示文摘采用RT-PCR技术对8株禽呼肠孤病毒(ARV)σNS基因进行了扩增,将获得的PCR产物分别与pMD18-T载体连接。测序结果表明,所构建的克隆质粒中均含有相应的σNS蛋白基因,大小为1 107bp。经DNAStar软件分析,除R1株外,其他ARV毒株的σNS基因核苷酸及其推导氨基酸序列与标准毒株S1133和1733株的同源性很高。Antheprot 5.0蛋白分析软件的分析结果表明,σNS蛋白无跨膜区,拥有较多的疏水区和抗原位点,可作为诊断候选蛋白。 | 谢丽基 谢芝勋 秦春香 | 2007 | 中国兽医科学2007，37，4： | 2 |
| 13 | 广西地区一株新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及σC基因遗传进化分析显示文摘为了解广西地区新型鸭呼肠孤病毒(novel Duck reovirus,NDRV)的分子流行病学特征并揭示其遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对某鸭场送检的病料进行病原鉴定,将鉴定为阳性的样品接种于9~10日龄SPF鸡胚尿囊腔进行病毒的分离,对分离到的毒株的σC基因进行扩增、克隆和测序,并与参考毒株σC基因序列进行比对分析,绘制系统进化树。结果表明:分离到一株NDRV毒株,命名为NDRV-GX株。该分离毒株与NDRV代表毒株高度同源,核苷酸相似性为92.5%~100%,氨基酸相似性为94.2%~100%;而与番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)及禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)分离毒株的核苷酸相似性为26.7%~37.2%,氨基酸相似性为27.8%~38.1%;与MDRV、ARV分离毒株处于进化树的不同分支,而与其他NDRV代表毒株处于同一分支。说明该分离毒株为NDRV,与NDRV代表毒株具有相近的遗传演化关系,同属于基因2型。 | 何奇松 温新瑞 蓝惠华 石永胜 马琳 熊毅 李媛 刘捷 陈洲 苏文广 | 2022 | 黑龙江畜牧兽医2022，，20： | 1 |
| 14 | 禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达显示文摘采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒(ARV)99G株σB编码基因,序列分析表明,99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90%~99%,而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60%;用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组表达质粒pGEX-σB;鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白的41.46%,融合蛋白的分子质量为66ku,主要以包涵体形式存在;Western-blot结果显示,该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应,表明重组蛋白具有良好的反应原性,可用于禽呼肠孤病毒病诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制。 | 张云 郝雪 耿宏伟 郭东春 | 2008 | 中国兽医科学2008，38，5： | 1 |
| 15 | 鸡病毒性关节炎病毒B-98株S1基因的克隆与序列分析显示文摘本试验对鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)包头地区分离株(B-98株)进行总RNA的提取。参考GenBank中ARV-S1133株S1基因组序列设计两对引物,应用RT-PCR技术特异性地扩增病毒的S1基因的cDNA片段,将S1基因cDNA克隆到pGEM-TEasy载体后进行测序。ARV S1基因包含3个开放阅读框(ORF1,ORF2和ORF3),分别编码P10、P17和SigmaC蛋白。应用计算机软件把所测得的序列与参考毒株ARV-176,ARV-138,ARV-S1133,Muscovy duck reovirus strain YJL(MDRV-YJL)的S1基因3个阅读框的核苷酸序列进行比较分析。结果表明:AVAV B-98株与ARV-176株P10、P17和SigmaC蛋白的核苷酸序列的同源性最高,与ARV-S1133株、MDRV-YJL株的同源性次之,与ARV-138株的同源性最低。 | 张晓凤 常继涛 关平原 李海念 乌日罕 马立峰 菊花 | 2007 | 中国兽医杂志2007，43，6： | 1 |
| 16 | 禽呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备显示文摘通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分子量约为42ku,主要以包涵体形式存在。重组蛋白经纯化后免疫新西兰白兔,三次免疫获得抗σC蛋白的高效免疫血清。经ELISA检测,该血清抗体效价为1∶105,并且能够与重组杆状病毒表达的σC蛋白发生特异性反应。禽呼肠孤病毒σC蛋白的表达与兔抗血清的制备为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。 | 孙美玉 秦立廷 高玉龙 祁小乐 高宏雷 王永强 王笑梅 | 2011 | 中国家禽2011，33，12： | 0 |
| 17 | 禽呼肠孤病毒(ARV)p10蛋白单克隆抗体的制备与鉴定显示文摘为了深入研究禽呼肠孤病毒(ARV)的致病机理,从其基因组中克隆病毒非结构蛋白p10基因,并将其与原核表达载体连接,转入大肠杆菌BL21中,使其表达携带His标签的p10融合蛋白,经镍柱纯化得到高纯度重组p10蛋白,以该蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过3次亚克隆后获得2株能够稳定分泌针对p10蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2B12与4H10。通过间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)方法测定其腹水效价均为1:1.01×10~7,亲合力解离常数(kD)分别为3.91×10^(-10)、5.75×10^(-10),2株单抗的IgG亚型均为IgG2b。经Western Blot鉴定,该2株抗体均能特异性识别ARV感染DF-1细胞中的p10蛋白。这些单抗的制备为深入研究ARV的致病机理奠定了基础。 | 何至远 吴海洋 王永强 李晓齐 曹红 郑世军 | 2015 | 中国兽医杂志2015，51，4： | 0 |
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